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色谱分离柱遇到基线漂移怎么办
点击次数:1593 更新时间:2022-11-10
  色谱柱的正确使用和维护十分重要,稍有不慎就会降低柱效、缩短使用寿命甚至损坏。在色谱操作过程中,需要注意下列问题,以维护色谱柱。
  如果你遇到基线漂移,知道是什么问题吗?漂移问题主要包括基线漂移和保留时间漂移。
  1基线漂移
  一般说来,机器刚起动时,基线容易漂移,大概要半个小时的平衡时间,如果,你用了缓冲溶液或缓冲盐,还有就是在低波长下(220nm)平衡时间相对会比较长,但是,如果你在实验过程中发现基线漂移,则你要考虑下面的原因:
  ①紫外灯能量不足。
  解决方法:
  更换新的紫外灯;
  ②柱温波动。
  解决方法:
  控制好柱子和流动相的温度,检查是否有打开的窗户或空调对着柱温箱。
  ③流通池被污染或有气体。
  解决方法:
  用甲醇或其他强极性溶剂冲洗流通池(最好断开柱子)。如有需要,可以用1N的硝酸(不要用盐酸)。
  ④流动相污染、变质或由低品质溶剂配成。
  解决方法:
  检查流动相的组成,使用高品质的化学试剂及HPLC级的溶剂。
  ⑤样品中有强保留的物质(高K'值)以馒头峰样被洗脱出,从而,表现出一个逐步升高的基线。
  解决方法:
  使用保护柱,如有必要,在进样之间。在分析过程中,定期用强溶剂冲洗柱子。
  ⑥检测器没有设定在最大吸收波长处。
  解决方法:
  将波长调整至最大吸收波长处;
  ⑦流动相的pH值没有调节好。
  解决方法:
  加适量的酸或碱调至最佳pH值;
  2保留时间漂移
  保留时间重现是液相性能好坏的一个重要标志,同一种东西,两次的保留时间相差不要超过15s,超过了半分钟可看做保留时间漂移,就无法进行定性,你要考虑以下原因:
  ①温控不当。
  解决方法:
  调好柱温,检查是否有打开的窗户或空调对着柱温箱。
  ②流动相比例变化。
  解决方法:
  检查四元泵的比例阀是否有故障。
  ③色谱柱没有平衡。
  解决方法:
  在每一次运行之前给予足够的时间平衡色谱柱。
  ④流速变化。
  解决方法:
  重新设定流速。
  ⑤泵中有气泡。
  解决方法:
  从泵中除去气泡。
  3峰型异常问题
  峰型问题是液相的主要问题,在做液相过程中,我们就是要变换不同的条件来改善不好的峰型,对于各种各样的异常峰,要区别对待,从主要问题出发,一个一个加以解决。
  ①所有峰均为宽峰。
  解决方法:
  系统未达到平衡;
  溶解样品的溶剂极性比流动相差很多;
  色谱柱尺寸及类型选择不正确;
  色谱柱或保护柱被污染或柱效降低;
  温度变化造成的影响。
  ②所出峰比预想的小。
  解决方法:
  样品黏度过大;进样品故障或进样体积误差;检测器设置不正确,定量环体积不正确;检测池污染;检测器灯出现问题。
  ③色谱图中未出峰。
  解决方法:
  系统未进样或样品分解;
  泵未输液或流动相使用不正确;
  检测器设置不正确;
  针对以上情况成因作相应调整即可。
  ④一个峰或几个峰是负峰。
  解决方法:
  流动相吸收本底高;进样过程中进入空气;样品组分的吸收低于流动相。
  ⑤所有峰均为负峰。
  解决方法:
  信号电缆接反或检测器输出极性设置颠倒;
  光学装置尚未达到平衡。
  ⑥出现双峰或肩峰。
  解决方法:
  进样量过大;样品浓度过高;
  保护柱或色谱柱柱头堵塞;
  保护拄或色谱柱污染或失效;
  柱塌陷或形成短通道。
  ⑦前伸峰。
  解决方法:
  进样量或样品浓度高;
  溶解样品的溶剂较流动。