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考虑色谱分离柱效时,要注意哪些问题
点击次数:480 发布时间:2022-06-17
  色谱分离柱在使用前,更好进行柱的性能测试,并将结果保存起来,作为今后评价柱性能变化的参考。但要注意:柱性能可能由于所使用的样品、流动相、柱温等条件的差异而有所不同;另外,在做柱性能测试时是按照色谱分离柱出厂报告中的条件进行(出厂测试所使用的条件是更佳条件),只有这样,测得的结果才有可比性。
 
  有效的办法是纯化样品。我们在多年的分析工作中发现,凡是样品纯化的越干净,分离柱的寿命就越长;反之,只有提取没有纯化的样品,分离柱柱效下降较快。建立一个理想的色谱分析方法应该有一套有效的样品前处理方法,特别是在分析血浆和尿液样品时,要特别注意样品的提取与纯化,尽量使处理过的样品中杂质降到较低,保护柱头和柱子。
 
  提取纯化好的样品最好用流动相来溶解,一方面减少色谱图中的溶剂峰干扰,另一方面也是检查样品在流动相中的溶解性,如果样品进样后在流动相中沉淀,会堵塞进样器和柱头,甚至样品分解,出现怪峰。如果出现样品与流动相不溶要设法改变溶解条件,如更换样品溶剂,或改进处理样品的方法,或过滤,去除不溶性物质。
 
  在考虑色谱分离柱效时,需要特别注意以下几个问题。
 
  一、决定组分保留值的分配系数:分配系数K=溶质在固定相中的浓度/溶质在流动相中的浓度。K值小的组分在固定相中浓度小,所以容易随流动相运动而较早出峰,反则反之。
 
  二、决定组分保留值的分配比(容量因子):容量因子=组分在固定相中的量/组分在流动相中的量。
 
  三、选择性因子α:即后出峰的组分的调整保留时间与先出峰的组分的调整保留时间的比值。
 
  因为组分在色谱分离柱内移动时,会逐步产生扩散,不利于分离,影响色谱分离柱的分离效率,所以塔板数高者好。使用过程中,当塔板数降到一定程度时该柱就报废了。
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